|
|
Produkce mcl-PHA pomocí vybraných bakterií
Eremka, Libor ; Němcová, Andrea (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Cílem práce bylo studium možnosti mikrobiální produkce polyhydroxyalkanoátů se střední délkou řetězce (mcl-PHA, „medium-chain-lenght PHA“). Pro produkci byly využity bakterie Pseudomonas putida a Pseudomonas aeruginosa. Teoretická část bakalářské práce se zabývá biosyntézou polyhydroxyalkanoátů, jejich materiálovými vlastnostmi a mikrobiálními producenty. V experimentální části byly vybrané bakterie kultivovány na různých substrátech za účelem vyhodnocení jejich schopnosti využívat různé uhlíkaté zdroje a akumulovat mcl-PHA. Množství a složení akumulovaných mcl-PHA v biomase bylo analyzováno pomocí plynové chromatografie s plameně ionizačním detektorem. Kmen Pseudomonas putida akumuluje více mcl-PHA v médiu obsahující řepkový olej ve srovnání s kmenem Pseudomonas aeruginosa. P. putida akumuluje 2,11% mcl-PHA při kultivaci na glycerolovém médiu.
|
|
|
Srovnání biocidní účinnosti dezinfekčních přípravků proti biofilmu
Šlitrová, Barbora ; Votava,, Miroslav (oponent) ; Omelková, Jiřina (vedoucí práce)
Pseudomonas aeruginosa je častým původcem nosokomiálních nákaz. Tento oportunní patogen je rezistentní vůči antibiotikům různých tříd i vůči biocidům. Některé jeho kmeny tvoří biofilm. Ve zdravotnictví představuje tvorba biofilmu značné riziko, které může vést až k závažnému onemocnění či úmrtí nemocného. Protože bakterie v biofilmu jsou odolnější než jejich planktonní formy, je důležité nalézt takové dezinfekční přípravky, které budou účinné i proti biofilmu. Byla otestována baktericidní účinnost čtyř dezinfekčních přípravků jak vůči biofilmu, tak na planktonních buňkách P. aeruginosa.
|
|
|
Interakce bakteriálních lektinů s epitelem lidských plic
Vyhnalová, Kateřina ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Bořek Dohalská, Lucie (oponent)
Cystická fibróza (CF) je autozomálně recesivní onemocnění způsobené mutacemi v genu CFTR (z angl. cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) kódujícího stejnojmenný chloridový kanál, který je přítomen na apikální membráně epiteliálních buněk. Důsledkem těchto mutací je narušen transepiteliální transport iontů a regulace dalších iontových kanálů. Cystická fibróza primárně postihuje respirační systém, kde v důsledku dysfunkce CFTR proteinu dochází k akumulaci nadměrně viskózního hlenu a ke změnám glykosylace sacharidových struktur na povrchu plicního epitelu. Tento patologický stav predisponuje pacienty s CF k bakteriálním infekcím plic, které jsou hlavní příčinou úmrtí pacientů s CF. Nejčastějším patogenem kolonizujícím respirační systém pacientů s CF je Pseudomonas aeruginosa (PA). Pro adhezi na hostitelskou tkáň PA využívá řadu faktorů virulence, včetně lektinu PA-IIL, který se vyznačuje nezvykle vysokou afinitou k L-fukose. V této práci byl studován vliv vybraných monosacharidů a multivalentních inhibitorů na bázi fukosy (glykoklastrů) na vazbu PA-IIL na epitel lidských plic. Pro zkoumání účinku daných agens ex vivo byly použity do parafinu zalité tkáně lidských plic fixované formalinem (FFPE tkáň; z angl. formalin-fixed paraffin-embedded tissue) zdravého jedince a pacienta s CF. Lektin...
|
|
|
Studium účinku plazmatu a plazmatem aktivované vody při léčbě bakteriálních infekcí
Korečková, Svatava ; Jirásek,, Vít (oponent) ; Kozáková, Zdenka (vedoucí práce)
Cílem této diplomové práce bylo připravit a charakterizovat plazmatem ošetřenou kapalinu (PTL), konkrétně fyziologický roztok pomocí různých plazmových systémů. Dále aplikovat připravené PTL na vybrané mikroorganismy pro zjištění jejich antimikrobiálního účinku. Byly vybrány systémy, které využívají přímou i nepřímou interakci plazmatu s kapalinou a plazma bylo generováno za atmosférického tlaku. Teoretická část je zaměřená na plazmatem ošetřenou vodu jako takovou, systémy, kterými lze plazmatem ošetřenou vodu produkovat, ale také popis charakterizace z pohledu množství aktivních částic nebo fyzikálně-chemických vlastností. Nalezneme zde také mikrobiologickou část této práce, a to konkrétně popis mikroorganismů zvolených pro experimentální práci. Rovněž je zde popsáno onemocnění otitis externa (zánět zevního zvukovodu) a možnosti jeho antibiotické léčby. V této práci byly testovány PTL připravené čtyřmi různými systémy: výboj za pomocí plazmové trysky ponořené do kapaliny se stejnosměrným nebo střídavým zdrojem napětí (PTLAC a PTLDC), dielektrický bariérový výboj s tekutou elektrodou (PTLDBD) a mikrovlnný výboj s povrchovou vlnou (PTLSW). Takto připravené roztoky byly nejprve charakterizovány z hlediska reaktivních částic (peroxid vodíku, dusičnany a dusitany) a změny měrné vodivosti a pH. Následuje mikrobiologické testování antimikrobiální účinnosti připravených PTL. Jako testovací mikroorganismy byly vybrány bakterie Staphylococcus pseudintermedius, Pseudomonas aeruginosa a kvasinka Malassezia pachydermatis. Tyto mikroorganismy byly vystaveny PTL a sledovány byly expoziční časy od 1 minuty až do 4 hodin. Po 24 hodinové kultivaci byl vyhodnocen antimikrobiální účinek počítáním kolonií a také pomocí programu Aurora metodou obrazové analýzy. Dalším krokem bylo sestavení antibiogramu a porovnání účinků připravených PTL v různých systémech s účinkem antibiotik. V této práci bylo dokázáno, že bakterie Pseudomonas aeruginosa je rezistentní na několik antibiotických látek. Připravená PTLDC by tedy mohla představovat možnost její inaktivace bez použití antibiotik. Staphylococcus pseudintermedius a Malassezia pachydermatis na žádné antibiotikum (antimykotikum) rezistenci nemají, ale při nesprávném užívání je možné riziko vzniku rezistence, proto byly i pro tyto mikroorganismy nalezeny PTL, které mají na dané mikroorganismy nejvyšší antimikrobiální účinek.
|
|
|
Diagnostika a léčba polyrezistentních druhů bakterií v Nemocnici Havlíčkův Brod
KOSTKOVÁ, Monika
Antibiotická rezistence je problémem nejen u nás, ale i ve světě. Stále více narůstá výskyt polyrezistentních druhů bakterií, které způsobují závažné a těžko léčitelné infekce. Tato problematika má dopady jak na zdravotní stav pacientů, tak na náklady zdravotní péče. Praktická část mé bakalářské práce byla prováděna v Laboratoři klinické mikrobiologické Nemocnice Havlíčkův Brod (ONHB). Vzorky byly odebírány z ONHB, z Psychiatrické nemocnice a od praktických lékařů z okolí Havlíčkova Brodu. V mé práci jsem se zaměřila na kmeny Klebsiella pneumoniae a Pseudomonas aeruginosa, které jsou častými původci nozokomiálních infekcí. Prvním krokem byla správná izolace a diagnostika těchto bakterií a vyšetření citlivosti bakterií k antibiotikům, kde jsem použila diskovou difuzní metodu, stanovení minimální inhibiční koncentraci a metody pro průkaz širokospektrých -laktamáz. Cílem této práce bylo zjistit zastoupení počtu těchto bakterií v komunitě a v nemocničním prostředí, kde jsem předpokládala, že v nemocničním prostředí je výskyt rezistentních bakterií vyšší. Dále jsem se zabývala vývojem rezistence těchto bakterií k daným antibiotikům za období 2017-2022. Na závěr jsem poukázala na správné zásady antibiotické politiky a tím i k předcházení vzniku rezistence k antibiotikům a dále i možnosti prevence a léčby nozokomiálních infekcí.
|
|
|
Prevalence of bacteriocins and their co-association with virulence factors within Pseudomonas aeruginosa catheter isolates
DUFKOVÁ, Kristýna
Urinary tract infections caused by Pseudomonas aeruginosa present a serious complication in the context of urinary catheter use. P. aeruginosa are equipped with various virulence determinants that may result in increased resistance. That contributes to higher morbidity and mortality in vulnerable patients. Pyocins are proteinaceous agents produced by pseudomonads with an antimicrobial effect targeting closely related bacteria. In this study, we examined the inhibition interactions among a set of 135 P. aeruginosa clinical isolates originated from the catheter-associated urinary tract infections. Togerther with pyocinogeny, the co-occurrence of other virulence factors and their co-association with pyocins were examined. The strong antagonistic interactions and high prevalence of pyocin genes among the isolates were observed. The overall competitive interactions provide promising findings in the area of alternative antibiotic approaches.
|
|
|
Studium profylaktického účinku glykoklastrů na modelu bakteriální adherence
Áčová, Andrea ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Kubíčková, Božena (oponent)
Cystická fibróza (CF), jakožto autosomálně-recesivní dědičné onemocnění způsobené mutaci v CFTR genu, způsobuje poruchu iontového kanálu, vlivem které pacienti trpí množstvím zdravotních problémů. Nejzávažnější jsou komplikace spojené s respirační soustavou. Hromadění hustého hlenu a pozměněná glykosylace v plicích vedou ke zvýšené adherenci bakteriálních buněk, především Pseudomonas aeruginosa (PA) a Burkholderia cepacia komlex, k plicním epiteliálním buňkám pacientů s CF. Předkládaná práce se zaměřením na jeden z virulentních faktorů PA, lektin PA-IIL, studuje adherenci kontrolního kmene PA (PAK; ST 1763) pod vlivem anti-PA-IIL slepičích protilátek IgY a multivalentních glykokonjugátů na bázi fukosy k plicním epiteliálním buňkám odebraným od zdravé osoby (NuLi-1) a osoby s CF (CuFi-1). Před samotným studiem adherence byla ověřena přítomnost PA-IIL v používané kultuře PAK pomocí metody "Western Blotting" s následnou imunodetekcí. Pro kvantitativní vyhodnocení adherenčního testu byly plicní epiteliální i bakteriální buňky nejprve fluorescenčně označeny barvivy PKH. Výsledky spektrofluorimetrického měření po provedení adherenčního testu byly také porovnány s mikroskopickým pozorováním adherence PAK. Různé frakce slepičích anti-PA-IIL protilátek z vaječných žloutků vykazovaly odlišný vliv na míru...
|
|
|
Vývoj modelového systému pro studium bakteriální adheze na plicní epitel pacientů s CF
Nosková, Libuše ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Švédová, Martina (oponent)
Cystická fibróza (CF) je geneticky podmíněné onemocnění nesoucí sebou řadu zdravotních komplikací. Hlavní komplikací je chronická kolonizace a infekce dýchacích cest pacientů specifickými mikroorganismy - zejména Pseudomonas aeruginosa. Právě infekce plic tímto mikroorganismem je nejčastější příčinou smrti pacientů s cystickou fibrózou. Ke kolonizaci dýchacích cest dochází prostřednictvím řady adhezivních struktur jako je například lektin PA-IIL. V současné době je nejpoužívanější terapií léčba antibiotiky, ale vzhledem ke vzniku rezistencí jsou hledány i jiné způsoby léčby. Jednou z možností je pasivní imunizace pacientů pomocí slepičích protilátek. Pro tento účel byly připraveny protilátky proti jedné z adhezivních struktur P. aeruginosa, proti rekombinantnímu lektinu PA-IIL. Tyto protilátky rozpoznávaly i nativní lektin Pa- IIL exprimovaný bakterií P. aeruginosa. Pro testování schopnosti protilátek zabránit adhezi bakterií na buňky plicního epitelu bylo třeba vyvinout vhodný modelový systém. Byly připraveny základní komponenty systému, epiteliální buňky a bakterie P. aeruginosa. Z dýchacích cest CF pacientů byly izolovány buňky 2 metodami - izolací přímo z tkáně a technikou "brushing". K vyhodnocení adhezních testů byl hledán vhodný objektivní způsob vyhodnocení založený na vizualizaci...
|
|
| |
|
|
Analýza plicních vzorků infikovaných Aspergillus fumigatus a Pseudomonas aeruginosa metodami rastrovací elektronové mikroskopie
Juříková, Tereza ; Benada, Oldřich (vedoucí práce) ; Nebesářová, Jana (oponent)
Infekční onemocnění představují i přes významný pokrok v medicíně ohrožení života, k čemuž přispívá nárůst multirezistentních kmenů mikroorganismů či pozdní odhalení původce onemocnění. Oportunně patogenní houba Aspergillus fumigatus vyvolává onemocnění dýchací soustavy, která nazýváme aspergilózy. Invazivní plicní aspergilóza se rozvíjí u imunokompromitovaných pacientů po vdechnutí všudypřítomných spor A. fumigatus a ročně na ni umírá 450 000 pacientů. V infikované tkáni se tvoří biofilm, který částečně chrání A. fumigatus před antimikrobiálními látkami. Pozdě zahájená terapie proto nemusí být dostatečně účinná. Infekce imunokompromitovaných pacientů a tvorba biofilmů je charakteristická i pro gram negativní bakterii Pseudomonas aeruginosa, která je díky produkci mnoha virulenčních faktorů a multirezistenci k antibiotikům obávaným oportunním patogenem. Rastrovací elektronová mikroskopie (SEM) poskytuje detailní informace o morfologii mikroorganismů s rozlišením desítek nanometrů, což umožňuje pozorovat mikroorganismy v infikované tkáni i její patologické změny. Hmotnostní spektrometrie umožňuje sledovat přítomnost a průběh infekce na základě detekce charakteristických molekul produkovaných mikroorganismy. Cílem této práce bylo optimalizovat přípravu vzorků plicní tkáně infikované A. fumigatus nebo...
|
host ::
RSS.